Ny chromatography ranon-javatra no fomba lehibe hitsapana ny votoatin'ny singa tsirairay sy ny loto ao amin'ny akora, mpanelanelana, fanomanana ary akora fonosana, saingy maro ny akora tsy manana fomba mahazatra hianteherana, noho izany dia tsy azo ihodivirana ny famolavolana fomba vaovao. Amin'ny fampivoarana ny fomba fizotry ny rano, ny tsanganana chromatography no fototry ny chromatography ranoka, noho izany dia zava-dehibe ny fisafidianana tsanganana chromatography mety. Amin'ity lahatsoratra ity, ny mpanoratra dia hanazava ny fomba hifidianana tsanganana chromatography ranon-javatra amin'ny lafiny telo: hevitra ankapobeny, fiheverana ary sehatra fampiharana.
A. Hevitra ankapobeny amin'ny fisafidianana tsanganana chromatography ranoka
1. Tombanana ny toetra ara-batana sy simika ny analyte: toy ny firafitry ny simika, ny solubility, ny fahamarinan-toerana (toy ny hoe mora ny oxidized / mihena / hydrolyzed), asidra sy alkalinity, sns., indrindra fa ny rafitra simika no fanalahidy. anton-javatra amin`ny famaritana ny fananana, toy ny conjugated vondrona manana taratra ultraviolet absorption mafy sy fluorescence mahery;
2. Farito ny tanjon'ny famakafakana: raha ilaina ny fisarahana avo, ny fahombiazan'ny tsanganana avo, ny fotoana famakafakana fohy, ny fahatsapana avo lenta, ny fanoherana avo lenta, ny fiainana tsanganana lava, ny vidiny ambany, sns.
- Misafidiana tsanganana chromatografika mety: fantaro ny firafitry, ny toetra ara-batana sy simika amin'ny famenoana chromatography, toy ny haben'ny poti, ny haben'ny pore, ny fandeferana ny mari-pana, ny fandeferana pH, ny adsorption ny analyte, sns.
- Hevitra ho an'ny fisafidianana tsanganana chromatography ranoka
Ity toko ity dia hiresaka momba ireo lafin-javatra hodinihina rehefa mifidy tsanganana chromatography avy amin'ny fomba fijery ny toetra ara-batana sy simika ao amin'ny tsanganana chromatography. 2.1 Filler matrix
2.1.1 Matrix gel silica Ny matrice famenoana ny ankamaroan'ny tsanganana chromatography ranoka dia gel silica. Ity karazana famenoana ity dia manana fahadiovana avo, vidiny mora, hery mekanika avo lenta, ary mora ovaina ny vondrona (toy ny fatorana phenyl, fatorana amino, fatorana cyano, sns), saingy voafetra ny sandan'ny pH sy ny mari-pana azony: ny Ny salan'isa pH amin'ny ankamaroan'ny famenoana matrix silica gel dia 2 ka hatramin'ny 8, fa ny isan-karazany pH amin'ireo dingana mifamatotra silica gel novaina manokana dia mety ho 1.5 ka hatramin'ny 10, ary misy ihany koa ireo dingana mifamatotra silica gel izay miorina amin'ny pH ambany, toy ny Agilent ZORBAX RRHD stablebond-C18, izay miorina amin'ny pH 1 hatramin'ny 8; Ny fetran'ny mari-pana ambony amin'ny matrix gel silica dia matetika 60 ℃, ary ny tsanganana chromatography sasany dia afaka mandefitra ny mari-pana 40 ℃ amin'ny pH avo.
2.1.2 Polymer matrix Ny polymer fillers dia polystyrene-divinylbenzene na polymethacrylate ny ankamaroany. Ny tombony amin'izy ireo dia ny mahazaka ny pH midadasika - azo ampiasaina amin'ny 1 hatramin'ny 14 izy ireo, ary mahatohitra kokoa ny mari-pana ambony (mety hahatratra 80 ° C). Raha ampitahaina amin'ny famenoana C18 mifototra amin'ny silica, ity karazana filler ity dia manana hydrophobicity matanjaka kokoa, ary ny polymère macroporous dia tena mahomby amin'ny fanasarahana santionany toy ny proteinina. Ny tsy fatiantoka dia ny fahombiazan'ny tsanganana dia ambany ary ny tanjaky ny mekanika dia malemy noho ny famenoana mifototra amin'ny silica. 2.2 Endriky ny singa
Ny ankamaroan'ny famenoana HPLC maoderina dia singa boribory, saingy indraindray dia poti-javatra tsy ara-dalàna. Ny singa boribory dia afaka manome fanerena ambany kokoa amin'ny tsanganana, ny fahombiazan'ny tsanganana ambony, ny fahamarinan-toerana ary ny fiainana lava kokoa; rehefa mampiasa dingana finday avo lenta (toy ny asidra phosphoric) na rehefa viscous ny vahaolana santionany, ny poti tsy ara-dalàna dia manana velaran-tany manokana lehibe kokoa, izay mety kokoa amin'ny hetsika feno amin'ny dingana roa, ary ny vidiny dia ambany. 2.3 Haben'ny singa
Ny kely kokoa ny haben'ny poti, ny avo kokoa ny fahombiazan'ny tsanganana sy ny avo kokoa ny fisarahana, fa ny ratsy kokoa ny fanoherana ny tsindry. Ny tsanganana be mpampiasa indrindra dia ny tsanganana habe 5 μm; raha avo ny fepetra takiana amin'ny fisarahana dia azo alaina ny filler 1.5-3 μm, izay mety amin'ny famahana ny olana amin'ny fisarahana amin'ny santionan'ny matrix be pitsiny sy singa maromaro. UPLC dia afaka mampiasa 1.5 μm fillers; 10 μm na famenoana habe lehibe kokoa dia matetika ampiasaina amin'ny tsanganana semi-preparative na preparative. 2.4 Ny votoatin'ny karbônina
Ny votoatin'ny karbôna dia manondro ny ampahany amin'ny dingana mifamatotra amin'ny endriky ny gel silica, izay mifandray amin'ny faritra manokana sy ny fandrakofana ny dingana mifamatotra. Ny votoatin'ny karbaona avo dia manome fahafaha-manao tsanganana avo sy famaha avo lenta, ary matetika ampiasaina amin'ny santionany sarotra mitaky fisarahana ambony, fa noho ny fe-potoana fifandraisana maharitra eo amin'ny dingana roa, ny fotoana fanadihadiana dia lava; Ny tsanganana chromatographique votoaty ambany karbaona dia manana fotoana famakafakana fohy kokoa ary afaka mampiseho fifantenana samihafa, ary matetika ampiasaina amin'ny santionany tsotra izay mitaky famakafakana haingana sy santionany izay mitaky fepetra avo lenta amin'ny rano. Amin'ny ankapobeny, ny votoatin'ny karbaona C18 dia eo amin'ny 7% hatramin'ny 19%. 2.5 Haben'ny mason-koditra sy velaran-tany manokana
Ny haino aman-jery adsorption HPLC dia potika pores, ary ny ankamaroan'ny fifandraisana dia mitranga ao anaty mason-koditra. Noho izany, ny molekiola dia tsy maintsy miditra ao amin'ny pores mba ho adsorbed sy hisaraka.
Ny haben'ny pore sy ny velaran-tany manokana dia hevitra roa mifameno. Ny haben'ny pore kely dia midika hoe velaran-tany manokana lehibe, ary ny mifamadika amin'izany. Ny velaran-tany lehibe iray manokana dia afaka mampitombo ny fifaneraserana eo amin'ny molekiola santionany sy ny dingana mifamatotra, manatsara ny fihazonana, mampitombo ny santionany sy ny fahafahan'ny tsanganana, ary ny fisarahana ireo singa sarotra. Ny filler porous feno dia an'ity karazana filler ity. Ho an'ireo izay manana fepetra avo lenta amin'ny fisarahana, dia soso-kevitra ny hisafidy fillers amin'ny faritra lehibe manokana; Ny faritra kely manokana dia afaka mampihena ny tsindry miverina, manatsara ny fahombiazan'ny tsanganana, ary mampihena ny fotoana equilibrium, izay mety amin'ny famakafakana gradient. Ny famenoana akora fototra dia an'ity karazana famenoana ity. Eo amin'ny fototry ny fiantohana ny fisarahana dia soso-kevitra ny hisafidy famenoana misy faritra kely manokana ho an'ireo manana fepetra avo lenta amin'ny famakafakana. 2.6 Ny haben'ny pore sy ny tanjaky ny mekanika
Pore volume, antsoina koa hoe "pore volume", dia manondro ny haben'ny void void isaky ny singa iray. Afaka maneho tsara ny tanjaky ny mekanika ny filler. Ny tanjaky ny mekanika amin'ny famenoana amin'ny haben'ny pore lehibe dia malemy kokoa noho ny an'ny famenoana amin'ny habe kely. Ny famenoana misy pore volume latsaky ny na mitovy amin'ny 1.5 mL / g dia matetika ampiasaina amin'ny fisarahana amin'ny HPLC, raha ny famenoana amin'ny haben'ny pore mihoatra ny 1.5 mL / g dia ampiasaina indrindra amin'ny chromatography manilika molekiola sy chromatography ambany tsindry. 2.7 Ny tahan'ny fameperana
Ny fametahana dia mety hampihena ny tampon'ny tailing vokatry ny fifandraisana misy eo amin'ny fitambarana sy ny vondrona silanol (toy ny fatorana ionika eo amin'ny kapoaky ny alkaline sy ny vondrona silanol, ny hery van der Waals ary ny fifamatorana hidrozenina eo amin'ny fitambarana asidra sy ny vondrona silanol), ka manatsara ny fahombiazan'ny tsanganana sy ny endriky ny tendrony. . Ny dingana mifamatotra tsy voafehy dia hamokatra fifantenana samihafa mifandraika amin'ny dingana mifamatotra voasarona, indrindra ho an'ny santionany polar.
- Fampiharana tsanganana chromatography ranoka samihafa
Ity toko ity dia mamaritra ny sahan'ny fampiharana ireo karazana tsanganana chromatography ranoka amin'ny toe-javatra sasany.
3.1 Tsanganana kromatografika C18 mivadika
Ny tsanganana C18 no tsanganana mivadika matetika indrindra, izay afaka mahafeno ny votoatiny sy ny fahalotoana amin'ny ankamaroan'ny akora organika, ary azo ampiharina amin'ny akora antonony-polar, polar malemy ary tsy polar. Ny karazana sy ny famaritana ny tsanganana chromatographic C18 dia tokony hofantenana araka ny fepetra takiana manokana. Ohatra, ho an'ny akora manana fepetra avo lenta, matetika ampiasaina ny 5 μm * 4,6 mm * 250 mm; ho an'ny akora misy matrices fisarahana sarotra sy polarity mitovy amin'izany, dia azo ampiasaina ny 4 μm * 4.6 mm * 250 mm na habe kely kokoa. Ohatra, ny mpanoratra dia nampiasa tsanganana 3 μm * 4.6 mm * 250 mm mba hamantarana ny loto roa genotoxic ao amin'ny celecoxib API. Ny fisarahan'ireo akora roa dia mety hahatratra 2.9, izay tena tsara. Ankoatr'izay, eo ambanin'ny toeran'ny fiantohana ny fisarahana, raha ilaina ny fanadihadiana haingana, dia matetika ny tsanganana fohy 10 mm na 15 mm no voafantina. Ohatra, rehefa nampiasa ny LC-MS/MS ny mpanoratra mba hamantarana ny fahalotoana genotoxic ao amin'ny piperaquine phosphate API, dia nisy tsanganana 3 μm * 2.1 mm * 100 mm nampiasaina. Ny fisarahana teo amin'ny loto sy ny singa fototra dia 2.0, ary ny fitadiavana santionany dia vita ao anatin'ny 5 minitra. 3.2 Tsanganana phenyl fase mivadika
Ny tsanganana phenyl koa dia karazana tsanganana mivadika. Ity karazana tsanganana ity dia manana fifantenana matanjaka ho an'ny zavatra simika aromatika. Raha malemy ny valin'ny fitambarana aromatika refesina amin'ny tsanganana C18 mahazatra, dia azonao atao ny manolo ny tsanganana phenyl. Ohatra, rehefa nanao celecoxib API aho, ny valin'ny singa fototra norefesina tamin'ny tsanganana phenyl an'ny mpanamboatra mitovy sy ny fepetra mitovy (5 μm * 4.6 mm * 250 mm) dia tokony ho 7 heny noho ny an'ny tsanganana C18. 3.3 Tsanganana dingana mahazatra
Amin'ny maha-fanampiana mahomby amin'ny tsanganana mivadika, ny tsanganana ara-dalàna dia mety amin'ny fitambarana polar be. Raha mbola tena haingana ny tampon'isa rehefa eluting amin'ny 90% aqueous dingana ao amin'ny tsanganana nivadika-dingana, ary na dia akaiky sy mifanipaka amin'ny solvent tampon'isa, dia azonao atao ny mihevitra ny hanolo ny ara-dalàna-dingana tsanganana. Ity karazana tsanganana ity dia ahitana tsanganana hilic, tsanganana amino, tsanganana cyano, sns.
3.3.1 Andry hilika Ny tsanganana hilic dia mazàna mampiditra vondrona hydrophilika ao anatin'ny rojo alkyl mifamatotra mba hanatsarana ny valin'ny akora polar. Ity karazana tsanganana ity dia mety amin'ny famakafakana ny akora siramamy. Nampiasa an'io karazana tsanganana io ny mpanoratra rehefa nanao ny atiny sy ny akora mifandraika amin'ny xylose sy ny derivatives. Ny isomeran'ny derivative xylose dia azo sarahina tsara ihany koa;
3.3.2 tsanganana amino sy tsanganana cyano tsanganana amino sy tsanganana cyano dia manondro ny fampidirana ny fanovana amino sy cyano amin'ny faran'ny rojo alkyl mifamatotra, tsirairay avy, mba hanatsarana ny fifantenana ny zavatra manokana: ohatra, tsanganana amino dia safidy tsara. ho fanasarahana siramamy, asidra amine, base ary amida; cyano tsanganana manana selectivity tsara kokoa rehefa manasaraka hydrogenated sy unhydrogenated rafitra mitovy akora noho ny fisian'ny conjugated fatorana. Ny tsanganana amino sy ny tsanganana cyano dia matetika azo afindra eo anelanelan'ny tsanganana amin'ny dingana mahazatra sy ny tsanganana amin'ny dingana miverina, saingy tsy soso-kevitra ny famadihana matetika. 3.4 Andry kiral
Ny tsanganana chiral, araka ny soso-kevitry ny anarana, dia mety amin'ny fisarahana sy famakafakana ny kapoaky ny chiral, indrindra amin'ny sehatry ny pharmaceutical. Ity karazana tsanganana ity dia azo raisina rehefa tsy afaka mahatratra ny fisarahan'ny isomer ny tsanganana mivadika mahazatra sy ny tsanganana mahazatra. Ohatra, ny mpanoratra dia nampiasa tsanganana chiral 5 μm * 4.6 mm * 250 mm mba hanasarahana ny isomera roa amin'ny 1,2-diphenylethylenediamine: (1S, 2S) -1, 2-diphenylethylenediamine ary (1R, 2R) -1, 2 -diphenylethylenediamine, ary ny fisarahana teo amin'izy roa dia nahatratra 2.0. Na izany aza, ny tsanganana kiral dia lafo kokoa noho ny karazana tsanganana hafa, matetika 1W+/piece. Raha ilaina ny tsanganana toy izany dia mila manao teti-bola ampy ny vondrona. 3.5 tsanganana fifanakalozana ion
Ny tsanganana fifanakalozana ion dia mety amin'ny fisarahana sy ny famakafakana ireo ion voampanga, toy ny ion, proteinina, asidra nokleika, ary akora siramamy sasany. Araka ny karazana filler, izy ireo dia mizara ho tsanganana fifanakalozana cation, tsanganana fifanakalozana anion, ary tsanganana fifanakalozana cation matanjaka.
Ny tsanganana fifanakalozana kation dia misy tsanganana mifototra amin'ny calcium sy hydrogène, izay mety indrindra amin'ny famakafakana ireo akora cationic toy ny asidra amino. Ohatra, ny mpanoratra dia nampiasa tsanganana mifototra amin'ny kalsioma rehefa manadihady kalsioma gluconate sy kalsioma acetate amin'ny vahaolana flushing. Ireo akora roa ireo dia nanana valiny matanjaka tamin'ny λ=210nm, ary nahatratra 3.0 ny haavon'ny fisarahana; Ny mpanoratra dia nampiasa tsanganana mifototra amin'ny hydrogène rehefa mamakafaka ireo akora mifandray amin'ny glucose. Maro ny akora lehibe mifandray - maltose, maltotriose ary fructose - nanana fahatsapana avo teo ambanin'ny detector differential, miaraka amin'ny fetran'ny fitiliana ambany 0.5 ppm ary ny mari-pahaizana fisarahana 2.0-2.5.
Ny tsanganana fifanakalozana anion dia mety indrindra amin'ny famakafakana ny akora anionika toy ny asidra organika sy ny ion halogen; Ny tsanganana fifanakalozam-bary matanjaka dia manana fahaiza-manao sy fifantenana ion avo kokoa, ary mety amin'ny fisarahana sy ny famakafakana ny santionany sarotra.
Ity etsy ambony ity dia fampidirana fotsiny ireo karazana sy velarana fampiharana ny tsanganana chromatography ranon-javatra mahazatra miaraka amin'ny traikefan'ny mpanoratra. Misy karazana tsanganana chromatography manokana hafa amin'ny fampiharana tena izy, toy ny tsanganana chromatography lehibe-pore, tsanganana chromatography kely-pore, tsanganana chromatography affinity, tsanganana chromatography multimode, tsanganana chromatography liquide ultra-high performance (UHPLC), tsanganana chromatography fluid supercritical ( SFC), sns. Manana anjara toerana lehibe amin'ny sehatra samihafa izy ireo. Ny karazana tsanganana chromatografika manokana dia tokony hofantenana araka ny rafitra sy ny fananan'ny santionany, ny fepetra takian'ny fisarahana ary ny tanjona hafa.
Fotoana fandefasana: Jun-14-2024